UF2471 Análisis de Ácidos Nucleicos

UNIDAD FORMATIVA 1. ANÁLISIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS

UNIDAD DIDÁCTICA 1. METODOLOGÍA APLICADA AL ANÁLISIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS

• Extracción. Purificación y análisis espectroscópico y electroforético de ácidos nucleicos.
• - Material y métodos
• Amplificación de ADN mediante PCR y variantes.
• - El ADN
• - Los enzimas
• - Los nucleótidos
• - Los cebadores
• - Limitaciones y problemas de la PCR (tamaño secuencias limitado, PCR previa, contaminación, inespecifidad de cebadores,…)
• Electroforesis y técnicas relacionadas.
• - Factores que afectan a la movilidad del ADN en el gel (masa molecular, voltaje, composición de las bases, temperatura, solución amortiguadora,…)
• - Tipos de electroforesis: PFGE (Pulsed Field Gel Electroforesis), OFAGE (Orthogonal Field Alternative Gel), FIGF (Field Inversion Gel Electroforesis), CHEF (Contour Clamped Homogeneus Electric Field), Electroforesis preparative.
• - Aplicaciones: Análisis comparativos de patrones de restricción cromosómicos, construcción de mapas cromosómicos, topología y tamaño de cromosomas, análisis de elementos extracromosómicos
• Hibridación de ácidos nucleicos.
• - Factores que influyen en la hibridación.
• - Composición de las bases.
• - Concentración de ADN/ARN y tiempos Cot y Rot
• - Concentración y tamaño de la sonda
• - Concentración ADN diana
• - Desnaturalización del ADN diana y fijación a un soporte.
• - Marcaje de una sonda monocadena
• - Hibridación: mezcla y renaturalización
• - Detección de los híbridos
• - Medio de reacción
• - Polímeros inertes
• - Tiempos de hibridación y mecanismos de detección.
• - Tipos de hibridación (soporte sólido, en fase líquida, in situ, in situ sobre cromosomas, in situ de bacterias para clonaje).
• Análisis de fragmentos de ADN.
• - Método Southerm
• - Métodos de transferencia (por capilaridad, por vacío, electroforético)
• - Aplicaciones del Método Southerm
• - Mapas de restricción
• - Detección de polimorfismos (RFLP, VNTR, STR) y deleciones.
• Secuenciación.
• - Secuenciación química, método de Maxam y Gilbert
• - Secuenciación enzimática, método de Sanger o de los dideoxinucleótidos.
• - Tipos de secuenciaciones enzimáticas (Cíclica, múltiple, automática, quimioluminiscente)
• Tecnología de microarrays y chips de ácidos nucléicos.
• - Utilidad: analizar el genoma completo de un organismo
• - Fundamento: hibridación con sondas
• - Soporte: placas microtitulación o membranas de blotting

UNIDAD DIDÁCTICA 2. PRINCIPIOS GENERALES DE ENFERMEDADES DE BASE GENÉTICA

• Genoma: células, cromosomas y genes.
• - Definición de genoma, gen y cromosoma
• - Organización, estabilización y localización del genoma
• Estructura y función de los genes y cromosomas.
• - Estructura del ADN
• - Estructura del ARN
• - El código genético
• - Secuencias codificantes versus no codificantes
• Bases cromosómicas de la enfermedad.
• - Citogenética. El cariotipo normal en los roedores de laboratorio
• - Anomalías del número de cromosomas (Heteroploidías)
• - Anomalías de la estructura de los cromosomas
• Herencia y enfermedad: enfermedades monogénicas, patrones de herencia, enfermedades poligénicas. Susceptibilidad genética.
• - Genético
• - Congénito
• - Hereditario
• Genética de las enfermedades comunes.
• - Modelos provenientes de mutaciones espontáneas o inducidas
• - Modelos generados por transgénesis
• - Modelos generados in Vitro por manipulación de células ES
• - Modelos generados por transgénesis condicional
• Genética de la reproducción y del diagnóstico prenatal.
• - Modelos animales del desarrollo embrionario
• - Diagnóstico prenatal rápido de aberraciones cromosómicas por PCR
• - Diagnóstico citogenético
• - Diagnóstico prenatal de enfermedades hereditarias
• Diagnóstico en medicina legal y forense.
• - VNTR
• - STR
• Modelos animales de enfermedad de base genética.
• - Modelos murinos de enfermedades hereditarias simples (mendelianas): Desórdenes de la visión, de la audición, neurológicos y neuromusculares. Enfermedades de los huesos y cartílagos, de la piel y el pelo, hematológicas, inmunodeficiencias y metabólicas
• - Modelos murinos de enfermedades hereditarias complejas (multigénicas): Cáncer, obesidad, diabetes, etc.